Koja je svrha pročišćavanja PCR proizvoda?

2024 Autor: Miles Stephen | [email protected]. Zadnja promjena: 2023-12-15 23:36

Pročišćavanje DNK iz a PCR reakcija je tipično neophodna za daljnju upotrebu i olakšava uklanjanje enzima, nukleotida, početnica i komponenti pufera. Tradicionalno se to postiže korištenjem metoda organske ekstrakcije, kao što je ekstrakcija fenolom kloroformom, nakon čega slijedi taloženje etanolom.

Također se postavlja pitanje zašto je potrebno pročišćavati PCR proizvode?

Trebaš pročistiti PCR proizvode riješiti se neiskorištenih početnica, nukleotida i enzima kako bi se optimizirao uspjeh ligacije, koja će održavati i sekvencirati proizvod od PCR . Do pročistiti the PCR proizvodi , koristi se ekskluzijska kromatografija.

Dodatno, što trebam učiniti nakon PCR-a? Za maksimalan oporavak, isperite retentatnu čašicu dvaput s 10 do 20 µL TE ili vode. Konačni PCR reakcija može sadržavati do mikrogram amplificirane DNA koja se može koristiti za razne primjene u molekularnoj biologiji. Ove aplikacije mogu biti manje ili više osjetljive na preostale komponente PCR reakcijska smjesa.

Netko se također može pitati, kako čistite PCR proizvode?

Klasične metode koje se koriste za čist gore PCR proizvodi prije sekvenciranja uključuju gel elektroforezu, taloženje etanolom i kolonsku kromatografiju. Iako su prilično učinkovite, ove metode mogu brzo postati glomazne pri paralelnoj obradi više uzoraka i pokazuju različite stupnjeve gubitka uzorka.

Zašto se DNK mora očistiti?

Mi čist gore DNK iz vodenih otopina za uklanjanje puferskih soli, enzima ili drugih tvari koje bi mogle utjecati na daljnje primjene. Primjeri uključuju PCR reakciju čist gore, čist gore nakon restrikcijskih digestija i čist genomskog ili plazmida DNK kontaminiran staničnim proteinima/otpadima.