Koliko košta transformacija ligacije?

2024 Autor: Miles Stephen | [email protected]. Zadnja promjena: 2023-12-15 23:36

Transformacija . Dodajte između 1-5 µl podvezivanje smjesu nadležnim stanicama za transformacija . Prošireno podvezivanje s PEG uzrokuje pad u transformacija učinkovitost (Brzo Ligacija Kit). Elektroporacija se preporučuje za velike konstrukcije (>10 000 bp).

U ovom slučaju, koliko mi je proizvoda za ligaciju potrebno za transformaciju?

Transformacija . Dodajte između 1-5 µl podvezivanje smjese nadležnim stanicama za transformacija . Prošireno podvezivanje s PEG uzrokuje pad u transformacija učinkovitost (Brzo Ligacija Kit). Elektroporacija se preporučuje za velike konstrukcije (>10 000 bp).

Potom se postavlja pitanje što je ligacija i transformacija? U tipičnom eksperimentu kloniranja, istraživači prvo umetnu dio DNK, kao što je gen, u kružni dio DNK koji se naziva plazmid. Ovaj korak koristi restrikcijske enzime i DNA ligazu i naziva se a podvezivanje . Poslije podvezivanje , sljedeći korak je prijenos DNK u bakterije u procesu tzv transformacija.

Nakon toga se također može zapitati koliko je DNK potrebno za podvezivanje?

Ukupna koncentracija vektora + umetka treba biti između 1-10 Μg/ml za učinkovitu podvezivanje . Vektor: Preporučuju se molarni omjeri umetnutih između 1:1 i 1:10 (tipično je 1:3). Ako niste sigurni u svoje DNK koncentracije, izvode više ligacija s različitim omjerima.

Koliko dugo možete pohraniti reakciju ligacije?

Ligacije mogu učiniti na sobnoj temperaturi ili hladnijem (mislim 12-16°C) preko noći ili čak nekoliko dana, ako ti stvarno sam zauzet. Možeš također pohraniti ligaciju u hladnjak i kasnije izvaditi da se ligiranje nastavi na sobnoj temperaturi kao dugo kako je potrebno.